可溶性还原糖的鉴定:生物组织中普遍存在的可溶性糖种类较多,常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖等。葡萄糖、果糖和麦芽糖的分子内含有醛基,醛基具有还原性,可与弱氧化剂反应。与醛基有特定颜色反应的化学试剂可用来鉴定这三种糖的存在。(1)利用斐林试剂:斐林试剂由质量浓度为0.1g/mL的Na0H溶液和质量浓度为0.05g/mLL的CuS04溶液配制而成,二者混合后,立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2在加热条件下与醛基反应,被还原成砖红色的Cu2O沉淀,醛基则被氧化为羧基。可见用斐林试剂只能鉴定还原性糖,不能鉴定可溶性的非还原性糖。用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时,溶液的颜色变化过程为:浅蓝色→棕色→砖红色(沉淀)。(2)利用班氏试剂:班氏试剂由A液(硫酸铜溶液),B液(柠檬酸钠和碳酸溶液)配制而成。将A溶液倾注人B液中,边加边搅拌,如有沉淀可过滤。实验原理与斐林试剂相似,所不同的是班氏试剂可长期使用。(3)利用银氨溶液:银氨溶液是在2%的AgNO3溶液中逐滴滴人2%的稀氨水,至最初产生的沉淀恰好溶解为止,这时得到的溶液就是银氨溶液。银氨溶液中含有Ag(NH3)20H(氢氧化二氨合银),这是一种弱氧化剂,能把醛基氧化成羧基,同时Ag+被还原成金属银。还原生成的银附着在试管壁上,形成银镜。可见,银镜反应也可用于鉴定可溶性还原糖。鉴定的结果是出现银镜。用班氏试剂鉴定可溶性还原糖,比用斐林试剂更简便。斐林试剂要现配现用,否则实验难以得到满意结果,因为此反应利用的是斐林试剂中的Cu(OH)2产物作为弱氧化剂参与与还原糖的反应,而我们知道,Cu(OH)2是一种沉淀物质,放置过久沉淀过多则不利于反应,而班氏试剂是斐林试剂的改良,它利用柠檬酸作为Cu2+的络合剂,使溶液稳定、灵敏度高且可以长期使用,故更简便。利用斐林试剂或班氏试剂可以进行尿糖检测。
实验原理:尿液中葡萄糖属可溶性还原糖,可以用班氏试剂或斐林试剂检验。
材料器具:人体新鲜尿液,试管,酒精灯,试管夹,火柴,滴管,班氏试剂。
步骤:
(1)在试管中加入1mL班氏试剂,加热到沸腾,如不变色,则可使用。
(2)再在试管中滴人2滴新鲜澄清的尿液,摇匀。
(3)加热上述混合液到沸腾,并持续2min~3min。
(4)观察试管内混合液颜色是否发生变化,是否有沉淀物产生,并按表5提示作出判断记录。
混合液现象 —记录符号 含糖量
混合液呈蓝色或蓝灰色 - 0.02g/100mL
出现浅黄绿色沉淀 + (0.1~0.5g)/100mL
出现黄绿色沉淀 ++ (0.5~1.4g)/100mL
出现黄色沉淀 +++ (1.4~2.0g)/100mL
出现橘黄色沉淀 ++++ 2.0g/100mL
注意事项:
(1)班氏试剂和尿液混合液的体积比例应为10∶1。
(2)如是糖尿病人,检验前两三天最好停止服药。
分析和讨论:正常人的尿中只含微量葡萄糖(小于0.02g/100mL),一般定性检验不能检出,一旦出现尿糖阳性现象,就叫做糖尿。如出现糖尿应及时请医生检查原因,并予以治疗。
苏丹Ⅲ染液和苏丹Ⅳ染液都是用于鉴定脂肪的染液。苏丹Ⅲ染液是一定量苏丹Ⅲ干粉溶于一定量95%的酒精中配制而成的溶液。脂肪小颗粒 + 苏丹Ⅲ染液→橘黄色小颗粒;苏丹Ⅳ染液是一定量苏丹Ⅳ干粉溶于一定量丙酮和一定量70%的酒精中配制而成的溶液。脂肪小颗粒 + 苏丹Ⅳ染液→红色小颗粒。苏丹Ⅳ染液与脂肪的亲和力比较强,染色的时间比较短(1min左右)。
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